發(fā)布時(shí)間:2023-07-02 21:42:13 人氣:886
1 ?目的
建立一個(gè)凈化車(chē)間潔凈區(室)沉降菌檢測的標準操作程序,保證潔凈區微生物檢測按規范執行。
2 ?范圍
公司所有潔凈區(室)的沉降菌測定和環(huán)境的驗證。
3 ?責任者
質(zhì)量技術(shù)部對本SOP實(shí)施負責。
4 ?程序
4.1??本測試方法采用沉降法,即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿,經(jīng)若干時(shí)間,在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計數,以平板培養皿中的菌落數來(lái)判定潔凈環(huán)境內的活微生物數,并以此來(lái)評定潔凈區(室)的潔凈度。
4.2??所用的儀器和設備
4.2.1??高壓蒸汽滅菌器
使用時(shí)應嚴格按照“高壓蒸汽滅菌器操作規程”和說(shuō)明書(shū)操作。
4.2.2??恒溫培養箱
必須定期對培養箱的溫度計進(jìn)行檢定。
4.2.3??培養皿
采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養皿。
4.2.4??培養基
4.2.4.1??普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。
4.2.4.2??培養基的準備及滅菌
4.2.4.2.1??將Φ90mm的培養皿置于121℃濕熱滅菌20min或180℃干熱滅菌2h。
4.2.4.2.2?將培養基加熱溶化,冷至45℃時(shí),在無(wú)菌操作要求下將培養基注入培養皿,每皿約15ml。
4.2.4.2.3??等瓊脂凝固后,將培養基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養箱中培養
48h,若培養基平皿上確無(wú)菌落生長(cháng),即可供采樣用。制備好的培養基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。
4.3??測試步驟
4.3.1??采樣方法
將已制備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置,打開(kāi)培養皿蓋,使培養基表面暴露0.5h,再將培養皿蓋蓋上后倒置。
4.3.2??培養
4.3.2.1??全部采樣結束后,將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。
4.3.2.2??在36℃±1培養箱中培養,時(shí)間不少于48h。
4.3.2.3??每批培養基應有對照試驗,檢驗培養基本身是否污染??擅颗x定3只培養皿作對照培養。
4.3.3??菌落計數
4.3.3.1??用肉眼直接計數,標記或在菌落計數器上點(diǎn)計,然后用5-10倍放大鏡檢查,有否遺漏。
4.3.3.2??若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊,可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。
5?注意事項
5.1??測試用具要作滅菌處理,以確保測試的可靠性、正確性。
5.2??采取一切措施防止人為對樣本的污染。
5.3??對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
5.4??由于細菌種類(lèi)繁多,差別甚大,計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察,不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落,并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5.5??采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量,如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。
6??測試規則
6.1??測試狀態(tài)
6.1.1??沉降菌測試前,被測試潔凈區(室)的溫濕度須達到規定的要求,靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。
6.1.2??沉降菌測試前,被測試潔凈區(室)已經(jīng)過(guò)消毒。
6.1.3??測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種,測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求,并在報告中注明測試狀態(tài)。
6.2??測試人員
6.2.1??測試人同必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
6.2.2??靜態(tài)測試時(shí),室內測試人員不得多于二人。
6.3??測試時(shí)間
6.3.1??對單向流,如100級凈化房間及層流工作臺,測試應在凈化空調系統正常運行不少于10min后開(kāi)始。
6.3.2??對非單向流,如10000級、100000級以上的凈化房間,測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開(kāi)始。
6.4??沉降菌計數
6.4.1??采樣點(diǎn)數目及其布置
6.4.1.1??最少采樣點(diǎn)數目
沉降法的最少采樣點(diǎn)數可按表1確定。
6.4.1.2??采樣點(diǎn)的布置
6.4.1.2.1??工作區采樣點(diǎn)的位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。
6.4.1.2.2??可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。
6.4.1.2.3??采樣點(diǎn)位置的詳細規則見(jiàn)附圖。
6.5??記錄
測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。
測試報告的編寫(xiě)見(jiàn)附表。
6.6??結果
6.6.1??用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。
6.6.2平均菌落數的計算,見(jiàn)下式。
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式中:M為平均菌落數
M1為1號培養皿菌落數
M2為2號培養皿菌落數
Mn為n號培養皿菌落數
n為培養皿總數。
6.7??結果評定
用平均菌落數判斷潔凈區(室)空氣中的微生物。100,000級潔凈區沉降菌(個(gè)/m2)應小于等于l0個(gè);10000級潔凈區沉降菌(個(gè)/m2)應小于等于3個(gè);100級潔凈區沉降菌(個(gè)/m2)應小于等于1個(gè)。
6.7.1??潔凈區(室)內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。
6.7.2??若某潔凈區(區)內的平均菌落數超過(guò)評定標準,則必須對此區域先進(jìn)行消毒,然后重新采樣兩次,測試結果均須合格。
沉降菌測試記錄
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