發(fā)布時(shí)間:2023-06-18 21:40:50 人氣:3600
1? 范圍:
? ??本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)無菌室和潔凈區(qū)中浮游菌的測(cè)試條件和測(cè)試方法。
? ??本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)藥工業(yè)無菌室和潔凈區(qū),無菌室或局部空氣凈化區(qū)域(包括潔凈工作臺(tái))的浮游菌的測(cè)試和環(huán)境的驗(yàn)證。
2? 引用標(biāo)準(zhǔn):GB/T 16293.2010
??? 藥品生產(chǎn)管理規(guī)范(1998修訂)附錄。
3? 標(biāo)準(zhǔn)
潔凈度級(jí)別 |
活微生物數(shù)/ m3 |
100級(jí) |
5 |
10000級(jí) |
100 |
100000級(jí) |
500 |
4? 測(cè)試方法
4.1? 方法提要
本標(biāo)本采用的方法是計(jì)數(shù)濃度法。即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基(選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基),經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長條件下讓其繁殖到可見菌落計(jì)數(shù),以判定該潔室的微生物濃度。
4.2人員的職責(zé)及培訓(xùn)
無菌室的測(cè)試人員應(yīng)進(jìn)行本專業(yè)的培訓(xùn)并獲得相應(yīng)的資格后才能才能履行對(duì)無菌室測(cè)試的職責(zé),其中包含涉及的衛(wèi)生知識(shí)和基本的微生物知識(shí)。
無菌室的測(cè)試人員應(yīng)選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級(jí)別要求相適應(yīng)的穿戴方式,外面的衣服不能帶進(jìn)100000級(jí)以上的區(qū)域。
4.3? 儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基
選擇合適的浮游菌采樣器,包括采用無油的抽氣泵,較低的氣流流速和較大的采樣流量,以保證培養(yǎng)基表面的水分布被吹干。
本測(cè)試需要具備儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基如下:
a) 浮游菌采樣器;
b) 培養(yǎng)皿;
c) 高壓消毒鍋;
d) 培養(yǎng)基;
e) 恒溫培養(yǎng)箱;??
4.4? 浮游菌采樣器原理
浮游菌采樣器一般采用撞擊法機(jī)理,可分為夾縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。夾縫式采樣器由內(nèi)部風(fēng)機(jī)將氣流吸入,通過采樣器的夾縫式平板,將采集空氣噴射并撞擊到緩慢的平板培養(yǎng)基表面,附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn),氣流從才樣器的前部進(jìn)入后部流出,在離心力的作用下,空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)間撞擊到專用的固型培養(yǎng)條上,附著活的微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個(gè)金屬蓋吸入,蓋子上是密集的經(jīng)過機(jī)械加工的特制小孔,通過風(fēng)機(jī)將收集到的細(xì)小的空氣直接撞擊到平板培養(yǎng)基表面,附著的活物微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)成型后形成菌落。
4.5? 測(cè)試要點(diǎn)
4.5.1? 必須按照儀器的檢定周期,定期對(duì)測(cè)試儀器作檢定。應(yīng)使用檢定合格,并且使用有效期內(nèi)的儀器。
4.5.2? 測(cè)試儀器未進(jìn)入被測(cè)區(qū)域時(shí),若必需,則先清洗表面吧,或在相應(yīng)的無菌室內(nèi)準(zhǔn)備和存放(用保護(hù)罩或其他適當(dāng)?shù)赝庹直Wo(hù)儀器)。
4.5.3? 在100級(jí)無菌室內(nèi)用紙時(shí),上面應(yīng)蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物,在100級(jí)的無菌室內(nèi)不能用鉛筆的橡皮。
4.5.4? 使用測(cè)試儀器時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照說明書操作。
4.5.4.1? 儀器開機(jī),預(yù)熱到穩(wěn)定后,方可按說明書的規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行校正,同時(shí)檢查采樣流量,并根據(jù)采樣量設(shè)定時(shí)間。
4.5.4.2?? 采樣口必須用使用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。
4.5.4.3? 采樣管嚴(yán)禁滲漏,內(nèi)壁應(yīng)光滑。
4.5.4.4?? 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測(cè)點(diǎn)的高度定,盡量減少彎曲。
4.6?? 培養(yǎng)皿
4.6.1? 一般采用φ90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿??筛鶕?jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。
4.6.2離心式采樣器采用專用的固型培養(yǎng)條
4.7? 培養(yǎng)基
???? 大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)或沙氏培養(yǎng)基(SDA)或其他用戶認(rèn)可并經(jīng)驗(yàn)證的培養(yǎng)基。
4.8 恒溫培養(yǎng)箱
??? 必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行效驗(yàn)
4.9? 測(cè)試步驟;
4.9.1? 測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。
4.9.1.1? 采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌,用于100級(jí)無菌室的采樣器
宜預(yù)先放在被測(cè)房間內(nèi)。
4.9.1.2? 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。
4.9.1.3? 采樣前,先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面,采樣結(jié)束,再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。
4.9.1.4? 采樣口及采樣管,使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對(duì)采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí),應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。
4.9.1.5? 采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服,在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前,雙手用消毒劑消毒或帶無菌手套操作。
4.9.1.6 采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿,開啟浮游菌采樣器,使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā),時(shí)間不少于5min,并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定時(shí)間。
4.9.1.7 關(guān)閉浮游采樣器,放入培養(yǎng)皿,蓋上蓋子。
4.9.1.8 置采樣口于采樣點(diǎn)后,開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。
4.10? 培養(yǎng)
4.10.1? 全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.10.2? 采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)配制的培養(yǎng)經(jīng)采樣后,在30℃~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時(shí)間不得少于2d;采用沙氏培養(yǎng)基(SDA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后,在20℃~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時(shí)間不少于5d。
4.10.3每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn),檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染??擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。
4.11? 菌落計(jì)數(shù)
4.11.1? 用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì),然后用5~10倍放大鏡檢查,有否遺漏。
4.11.2? 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊,可分辯時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
4.12? 注意事項(xiàng)
4.12.1 使用前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿質(zhì)量,培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能用使用的。
4.12.2 對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)記錄。
4.12.3 由于細(xì)菌種類繁多,差別甚大,計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿面或真面仔細(xì)觀察,不要有遺漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,并須要菌菌落或培養(yǎng)基沉淀的物區(qū)別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5? 測(cè)試規(guī)則
5.1 測(cè)試條件
在測(cè)試之前要,要對(duì)無菌室相關(guān)參數(shù)進(jìn)行預(yù)先測(cè)試,這類測(cè)試將會(huì)提供測(cè)試懸浮粒子的環(huán)境條件,例如:這種預(yù)先測(cè)試或可包括:
a)? 溫度和相對(duì)濕度的測(cè)試。? 無菌室的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適
應(yīng)(無特殊要求時(shí),溫度控制在18℃~26℃,相對(duì)濕度控制在45%~65%之間為宜)。同時(shí)滿
足測(cè)試儀器的使用范圍;
b)? 室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測(cè)試的測(cè)試,或壓差的測(cè)試;
c)? 高效過濾器的泄漏測(cè)試
5.2? 測(cè)試狀態(tài)
??? 靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測(cè)試。
靜態(tài)測(cè)試時(shí),室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人
浮游菌測(cè)試前,被測(cè)定無菌室(區(qū))由用戶決定是否需要預(yù)先消毒.
??? 浮游菌測(cè)試時(shí)應(yīng)標(biāo)明測(cè)試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測(cè)試人員數(shù)。
5.3? 測(cè)試時(shí)間
5.3.1? 在空態(tài)或靜態(tài)a測(cè)試時(shí),對(duì)單向流無菌室而言,測(cè)試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min后開始。對(duì)非單向流無菌室,測(cè)試宜在凈化系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30min后開始。在靜態(tài)b測(cè)試時(shí),對(duì)單向流潔凈是(區(qū)),測(cè)試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過10min自凈后開始;;對(duì)非單向無菌室,測(cè)試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過20min自凈后開始。
5.3.2? 在動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí),則須記錄生產(chǎn)開始的時(shí)間以及測(cè)試時(shí)間。
5.4.浮游菌濃度的計(jì)算