發(fā)布時(shí)間：2023-06-26 21:41:49 人氣：2413
1、菌落：細菌培養后，由一個(gè)或幾個(gè)細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡(jiǎn)稱(chēng)CFU。通常用個(gè)數表示。
2、測試方法：沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經(jīng)48小時(shí)以上培養，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數，來(lái)評定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來(lái)評定無(wú)塵室的潔凈度。
3、所用的儀器和設備
1）高壓消毒鍋：使用時(shí)參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進(jìn)行操作。
2）恒溫培養箱：必須定期對培養箱的溫度計進(jìn)行檢定。
3）培養皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
4、培養基：普通營(yíng)養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無(wú)菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養數小時(shí)，若培養基平皿上確無(wú)菌落生長(cháng)，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環(huán)境中存放。
5、測試步驟
1）采樣方法：將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養皿蓋上蓋后倒置。
2）培養，時(shí)間不少于48小時(shí)。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。
3）菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計數。
6、注意事項
1）測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
2）采取一切措施防止人為對樣本的污染。
3）對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
4）由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5）采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。
7、測試規則
1）測試狀態(tài)
（1）沉降菌測試前：被測試無(wú)塵室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、必須控制在規定值內。被測試無(wú)塵室（區）已消毒。
（2）測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報告中注明測試狀態(tài)。
（3）測試人員：測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2個(gè)人。
2）測試時(shí)間
（1）對單向流，如100級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開(kāi)始。
（2）對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開(kāi)始。
8沉降菌計數
1）最少采樣點(diǎn)數目：可按表1確定。在滿(mǎn)足最少測點(diǎn)數的同時(shí)，還宜滿(mǎn)足最少培養皿數，見(jiàn)表2。??表1最少采樣點(diǎn)數目
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面積(m2)? |
潔凈度級別 |
|||
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100? |
10000? |
100000? |
300000 |
|
＜10? |
2～3? |
2? |
2? |
2 |
|
≥10～＜20? |
4? |
2? |
2? |
2 |
|
≥20～＜40? |
8? |
2? |
2? |
2 |
|
≥40～＜100? |
16? |
4? |
2? |
2 |
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≥100～＜200? |
40? |
10? |
3? |
3 |
注：表中的面積對于單向流無(wú)塵室是指送風(fēng)面積，對于非單向流無(wú)塵室是指房間面積。?????????表2最少培養皿數
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潔凈度級別? |
所需Φ90mm培養皿數（以沉降0.5小時(shí)計） |
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100 |
?14 |
|
10000 |
2 |
|
100000 |
?2 |
|
300000 |
2 |
2）采樣點(diǎn)的布置：工作區測試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某 局部區域過(guò)于集中，某局部區域過(guò)于稀疏。
3）記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數據。
4）結果計算：用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見(jiàn)下式：m1+m2+……+mn
平均菌落數m=n
式中：m為平均菌落數；m1為1號培養皿菌落數；m2為2號培養皿菌落數；mn為n號培養皿菌落數；n為培養皿總數。
5）結果評定：用平均菌落數判斷無(wú)塵室的空氣中的微生物。
6）無(wú)塵室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準（見(jiàn)表3）。????????????????????表3
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潔凈級別? |
100級? |
10000級? |
100000級? |
300000級 |
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標準（平均）? |
1個(gè)/皿? |
3個(gè)/皿? |
10個(gè)/皿? |
15個(gè)/皿 |
7）若某無(wú)塵室（區）的平均菌落數超過(guò)評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。
主要參考文獻：國家標準GB/T 16294-1996
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